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防己中逆转非小细胞肺癌化疗耐药性有效成分的筛选及分子机制研究

 
【摘要】:肺癌是全球最常见的癌症,是我国癌症发病及死因的第一位。进展期非小细胞肺癌(NSCLC)最为多见,且5年生存率仍低。近年来虽治疗手段不断发展,化疗仍是目前我国进展期NSCLC主要的治疗手段。最常用的是紫杉醇类联合铂类的化疗。但由于耐药问题造成的“治疗瓶颈”仍未攻克,限制其临床获益。我国传统中药干预肿瘤化疗耐药逐渐受到研究者重视,利用大数据分析方法系统筛选中药有效成分,通过更为科学的试验方法验证其可能逆转化疗药物耐药的作用,从而增加化疗药物治疗效果的探索仍具有现实意义和实用价值。为详细了解国内外肺癌化疗、靶向治疗耐药研究领域的现状和发展趋势,本研究用循证医学可视化分析方法,全面分析了与该研究领域相关的中英文文献。用计算机检索了与该研究相关的中国生物医学文献数据库、中国知网、万方数据库的中文文献,检索Pub Med、EMbase、The Cochrane Library数据库的英文文献。按照纳入与排除标准进行文献筛选,用BICOMS 2分析软件对关键词、发文量作者信息等进行抽取和整理并生成共现矩阵及词篇矩阵,并利用Net Draw2.089和g CLUTO1.0绘制网络图和聚类分析。共筛选纳入我国肺癌化疗耐药性研究文章1250篇,发表始于1996年,之后逐年增加;研究热点主要有4个方面。共纳入英文文献2893篇;文章发表始于1995,2015年达到顶峰;纳入文章中的主要主题词有1398个,其中Lung Neoplasms、Drug Resistance、Neoplasm、Antineoplastic Agents、Carcinoma、Non-Small-Cell Lung、Receptor o F Epidermal Growth Factor等处于核心位置;研究主题主要包括紫杉醇等植物源性抗肿瘤剂等在治疗肺癌中多药耐药性机制的研究进展等在内的4个方面。分析肺癌分子靶向治疗耐药研究的中英文文献显示该领域研究已开展20余年,研究主题主要围绕分子靶向药物耐药产生的机制探索。总体结论,近十年来,肺癌耐药问题逐渐受到全球研究者关注,特别是近五年。主要研究热点围绕NSCLC耐药与紫杉醇等药物耐药可能的分子机制展开。再此基础上,本研究行中药逆转NSCLC紫杉醇耐药的相关探索。为了解我国中药在逆转化疗耐药方面的研究现状及中药选择的特点,本研究用BICOMS分析软件和Ucinet6.0软件对该领域研究文献进行系统地可视化分析。共筛选出符合纳入排除标准的文献977篇,通过信息抽提整理,共筛查出19类、261味中药。整体中药分析结果呈现:在所有中药中防己、黄芪、苦参、人参、川芎、党参等药物在中药逆转化疗耐药研究中应用较多,其中防己为该领域研究中最具潜力的中药,故本研究中选用防己作为可能逆转NSCLC紫杉醇耐药的研究药物。为筛选中药防己的活性成分及相应的作用靶点,本研究利用网络药理学方法和TCMSP数据库筛选,检索防己的化学成分。设置类药性(DL)≥0.18,筛选出防己的活性成分,通过Swisstarget数据库查询并整理与之相对应的靶点。构建防己的活性成分-靶点网络,靶蛋白互作网络(PPI),于DAVID网站进行靶点GO(gene ontology)功能富集和KEGG信号通路富集。收集防己主要活性成分15种,相对应靶点105个,参与体内生物过程67条。其中与NSCLC相关的药用成分8个,相对应靶点3个。为进一步探索防己中可能逆转NSCLC紫杉醇耐药的药用成分,及其可能的作用机制,本研究采用RTCA实验技术验证防己中的8种药用成分分别对A549/PTX增殖的抑制作用,发现β-sitosterol、Dichotomitin、menispermine、menisperine等成分对A549/PTX的增殖具有抑制作用,其中β-sitosterol的抑制作用最为明显。因此选用β-sitosterol行干预A549/PTX的试验,通过表达谱高通量测序来筛选基因表达的变化,结合网络药理学的结果,使用Q-PCR、WESTERN BLOT、流式细胞仪、激光共聚焦等技术,验证了部分相关基因。结果显示,β-sitosterol对A549/PTX细胞AR/HSP90信号通路中的HSP90、KLK3基因有下调作用,同时上调线粒体/CASP9凋亡信号通路中的CASP9、CASP3、BCL2、BAX基因。由此可见,在一定程度上,中药防己中的β-sitosterol可以逆转NSCLC的紫杉醇的耐药性。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R734.2

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